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            引物合成儀是如何作用的

            更新時間:2023-08-08      點擊次數:544
              一、引物是如何合成的?目前引物合成基本采用固相亞磷酰胺三酯法。dna合成儀有很多種,主要都是由abi/pe公司生產,無論采用什么機器合成,合成的原理都相同,主要差別在于合成產率的高低,試劑消耗量的不同和單個循環用時的多少。
             
              二、主要為abi3900高通量合成儀,合成長鏈主要采用beckman1000m和pe8909dna合成儀,引物修飾和高od數合成采用abi394等。亞磷酰胺三酯法合成dna片段,具有高效、快速的偶聯以及起始反應物比較穩定的特點。亞磷酰胺三酯法是將dna固定在固相載體上完成dna鏈的合成的,合成的方向是由待合成引物的3'端向5'端合成的,相鄰的核苷酸通過3'→5'磷酸二酯鍵連接。第一步是將預先連接在固相載體cpg上的活性基團被保護的核苷酸與三氯YI酸反應,脫去其5'-羥基的保護基團dmt。
             
              三、PCR是為測序富集模板DNA的一種相對簡單的方法。為保證DNA序列準確性,強烈建議使用高保真PCR來制備測序模板。在Sanger測序中,PCR擴增片段經純化并用于測序反應。使用常用的測序引物結合位點(如M13或T7“通用引物”結合位點)對PCR引物的5′末端進行標記,以簡化測序工作流程。
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