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轉染效率低?這份細胞轉染攻略,快收藏了吧!

更新時間:2024-01-29

閱讀:100


01 細胞轉染的分類


從導入的核酸存在于宿主細胞的時間長短,可將轉染分為瞬時轉染和穩定轉染。

瞬時轉染(transient transfection):指將構建好的質粒通過某種方式導入到哺乳動物細胞內,該質粒上的外源基因不整合到細胞自身的基因組上。瞬時轉染的基因表達是快速且短暫的,通常只能維持幾天。這種轉染方式主要用于快速檢測基因功能或蛋白質表達,例如了解基因沉默、抑制性RNA和小規模蛋白質生產等。

穩定轉染(Stable transfected):將外源DNA整合到宿主細胞的基因組中,這種整合過程需要更長時間和更復雜的操作。穩定轉染后的基因表達是長期且穩定的,因為外源基因會被傳遞給子代細胞。這種轉染方式主要用于長期表達目標基因的實驗,例如生產重組蛋白、進行基因敲除或敲入等研究。穩定轉染也用于藥物篩選、研究形態變化、抗生素耐藥性等領域。

細胞轉染通??煞譃槿愅緩椒謩e為物理介導、化學介導和生物介導。

物理介導:電穿孔法、顯微注射和基因槍等

化學介導:如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法和多種陽離子物質介導技術等

生物介導:病毒介導,逆轉錄病毒、腺病毒等


問題來了,該怎么選擇合適的轉染方法呢?

小編對這三個途徑的常用方法進行了總結,記得給小編點個收藏hahaha~


物理介導——電穿孔法

原理:電流能夠擊穿細胞膜形成瞬時的水通路或膜上小孔促使DNA分子進入胞內。

優點:原理簡單;不需要載體。

缺點:需要特殊設備,電流對細胞傷害非常大。


化學介導——脂質體轉染

原理:陽離子脂質體表面帶正電荷,與核酸的磷酸根通過靜電作用,將DNA分子進行包裹,形成DNA脂復合物,能被表面帶負電的細胞膜吸附,再通過細胞內吞進入細胞。

優點:操作比較簡單,轉染效率高。

缺點:需要進行條件優化;有些細胞體系不易轉染;對血清敏感;價格較高。


化學介導——陽離子聚合物

原理:與脂質體轉染原理相似,都是利用陽離子與核酸結合成復合物,利用細胞內吞進入細胞內。

優點:在血清內穩定;對細胞毒性相對較低;轉染率高;性價比高。

缺點:需要對體系進行條件優化;有些細胞體系不易轉染。


生物介導——病毒感染

原理:通過侵染宿主細胞從而將外源基因導入到細胞中。

優點:高轉染率;適用性廣。

缺點:需要對體系進行條件優化;需要構建病毒載體,步驟較為復雜。


然而,一種方法不會適用于所有的細胞和實驗,理想的轉染方法應該根據自己的細胞類型和實驗需求來選擇。合適的細胞轉染方法應具有高轉染效率,低細胞毒性對正常生理學的影響最小,且易于使用可重復性等特點。





02 在轉染過程中的注意事項

細胞轉染效率往往受到很多因素的影響,從細胞類型、細胞培養條件和細胞生長狀態,到轉染方法的操作細節,都需要考慮,所以細胞轉染是一個常規但并不簡單的實驗。在進行轉染實驗時,需要注意以下事項:

細胞狀態:確保細胞處于良好的生長狀態,并在轉染前處于指數生長期。

轉染試劑選擇:根據細胞類型和實驗目的選擇適當的轉染試劑。

DNA/RNA質量:使用高質量的DNA或RNA,并確保其大小適宜。

轉染時間:根據細胞類型和轉染試劑確定最佳的轉染時間。

健康細胞培養物和操作:保持細胞健康,避免RNA酶和其他污染源的污染。

純化RNA:在轉染前,使用適當的方法純化RNA,以去除多余的核苷酸、小的寡核苷酸、蛋白和鹽離子。

避免RNA酶污染:確保實驗環境中沒有RNA酶,防止對實驗結果產生影響。

重復實驗:為了確保實驗結果的可靠性和可重復性,需要進行多次重復實驗。

轉染效率檢測:轉染完成后需要對轉染效率進行檢測,對實驗數據進行正確的分析和解釋,避免因誤判而得出錯誤的結論。


說到這里,小編給大家推薦一款轉染試劑,那就是——Invitrogen的Lipofectamine™ 3000轉染試劑。

Lipofectamine™ 3000轉染試劑采用先進的脂肪納米微粒技術,實現了優越轉染性能。對于多種難轉染和常見的細胞(例如 HEK293、HeLa),該試劑在保證轉染效率的同時也提高了細胞存活率。

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Lipofectamine™ 3000轉染試劑專門針對難轉染的細胞種類進行了優化,能夠為廣泛的細胞種類提供越的轉染性能。其可高效轉染的細胞類型包括:

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產品貨號

包裝規格

L3000001

0.1 mL

L3000008

0.75 mL

L3000015

1.5 mL

L3000075

5x1.5 mL

L3000150

15 mL

覺得這款不合適?華雅還有更多轉染試劑,聯系客服了解?。?!



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